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流式细胞仪检测细胞凋亡1 - 罗丹明123,DiOC 6(

发布时间:2019-02-17 08:14编辑:英国365bet官浏览(80)

    如果试剂是自配对的,请访问http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?见mod = viewthreadtid = 200。
    材料:
    正常靶细胞的培养
    罗丹明12310μM(R 123,制备方法见前面的链接)或10μM DiOC 6(3)(参见前面的制备0.1 mM储备溶液的链接)或0.2 mM JC-1储备溶液(参见前面的链接制备方法)
    磷酸盐缓冲液(PBS)
    在蒸馏水中制备1mg / ml碘化丙啶(PI)并在4℃下在黑暗中储存
    适用于流式细胞仪的12 x 75 mm试管
    配备488 nm激光和滤光片,可收集绿色,橙色,红色光。
    R123或DiOC6(3)和PI染色
    1A。每10 6个细胞向培养的细胞中加入20μl10μMR123(终浓度200nM)或5μl10μM。 ?DiOC 6(3),在黑暗中于37℃温育20分钟。
    2A。在室温下以300×g离心5分钟并重悬于1ml PBS中。
    3A。加入10μl避光的PI溶液,在室温下放置5分钟。
    4A。 仪器上的检测和分析在530±下收集侧向散射光,绿色荧光(R 123或DiOC 6(3)),用488nm激光激发并设置以提高信号激活阈值。在600nm以上收集20nm和红光(PI)。
    JC-1染色
    1B。将细胞沉淀(~10 6个细胞)重悬于1ml含有10%血清的细胞培养基中。
    2B。加入10μl0.2mMJC-1储备溶液,在加入期间或加入后20秒内剧烈摇动,用PBS洗涤两次,并在室温下以200×g离心5分钟。
    (注意:如果在添加JC - 1时没有剧烈摇晃,则更容易形成沉淀物,但如果振动太剧烈,则可能会损坏细胞。)
    3B。避光,在室温下孵育15分钟。
    4B。仪器中的检测和分析使用488nm激发在530±20nm下收集绿色荧光,并用570±20nm带通滤波器或570nm长通滤波器收集橙色光。
    [仅用于研究和研究的中国传输网络的原始文本翻译]